华北水利水电大学水之源社会实践队——水源总大肠杆菌群的检验二

2019年8月28日一早，华北水利水电大学水之源社会实践队一早集合在了实验室中，紧接着昨天已经完成的第一阶段，即大肠杆菌培养基的制备，水样的采集，保藏和发酵，展开了本实验的第二阶段——大肠杆菌标本的制备以及显微镜下的观察。

微生物的细胞小而透明，在普通光学显微镜下与背景的反差小而不易识别，为了增加色差，必须经过染色。革兰氏染色法以其简易的操作方式和明显的鉴别结果，成为了最常用的鉴别染色方式。革兰氏染色法的染色程度与细菌的等电点和细胞壁有关，等电点越高，细胞壁脂质含量越高，肽聚糖含量越低，其与草酸铵结晶紫的结合力越弱，草酸铵结晶紫，碘-碘化钾复合物越容易被乙醇提取而使得菌体呈无色，此时再用番红染色液染色一分钟，使细胞呈红色，此种细胞被称为为革兰氏阴性菌。而大肠杆菌就是一种革兰氏阴性菌。

因此，小组成员首先进行大肠杆菌装片的制备，并用革兰氏染色法染色。小组成员首先按编号从昨日制作的大肠杆菌培养皿中选取符合下面特征的菌落：1.紫红色，具有金属光泽的菌落 2.深红色，不带或略带金属光泽的菌落 2.淡红色，中心色较深的菌落，挑取少量具有以上特征的菌种涂抹于对应编号的干净载玻片中央的一滴无菌水中并涂抹均匀。干燥后滴加草酸铵结晶紫染液染色1-2分钟。倾去染液，斜置用水冲去多余染液，直至流出的水呈现无色。然后滴加革兰氏碘液染色1-2分钟，后再水洗。滴加体积分数为95%的乙醇约45秒后水洗。最后进行复染，滴加番红染色液染色2-3分钟，水洗并使之干燥，按顺序列好。大肠杆菌的染色标本制备完成。

接着，大肠杆菌的染色标本被呈至显微镜下进行观察，由一名同学操作显微镜观察样本，一名同学进行记录，记录该编号标本的观察结果。标本制备良好，且菌体与显微镜下清晰可见的样本，或与预想有差异的样本，将召集小组成员轮流观察学习。

组员观察记录完成后，清洗培养皿等试验用具，将实验室收拾整理干净，试验由对应组员回去后整理本次试验的记录结果，在小组成员的共同努力下，本次实验圆满结束。

本次实验，不仅提高了小组成员对大肠杆菌的认识，还促进了成员间团结协作的能力。没有成员们的共同努力，这个试验无法如同预期拌顺利而快速的完成。

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